Efeitos in vitro e in vivo dos inibidores da protease do HIV Atazanavir e Darunavir nos fatores de virulência de Candida albicans: formação de biofilme, filamentação e infecção em modelo de Galleria mellonella / In vitro and in vivo effects of the HIV Protease Inhibitors Atazanavir and Darunavir in virulence factors of Candida albicans: biofilm formation, hyphae formation and infection in Galleria mellonella model

RESUMO

Candida albicans é um fungo que habitualmente coloniza superfícies mucosas de humanos e pode assumir caráter patogênico a depender de fatores do hospedeiro. Portadores da Síndrome da Imunodeficiência Humana, causada pelo Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), são propícios a apresentar candidose nas mucosas devido a imunodeficiência celular que apresentam. A introdução da Terapia Antirretroviral (TARV), em especial o surgimento dos Inibidores da Protease do HIV (IPs-HIV), reduziu drasticamente a incidência e prevalência destas patologias ao longo dos anos. Estudos clínicos e epidemiológicos com IPs-HIV de primeira geração demostraram que tal redução não se deve exclusivamente à melhora imunológica promovida pela TARV, e pesquisas in vitro já demonstraram propriedades antifúngicas e antibiofilme de alguns IPs-HIV de primeiras gerações em C. albicans. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos do Atazanavir (ATV) e Darunavir (DRV), dois IPs-HIV de segunda e terceira geração respectivamente em uso clínico atual no Brasil, em diferentes fatores de virulência de C. albicans. Para isso foram realizados estudos com duas cepas clínicas de C. albicans isoladas de lesões de candidose orofaríngea de pacientes portadores de HIV para avaliar a ação in vitro das drogas na morfogênese, formação de biofilme (contagem de células viáveis e quantificação de biomassa) e na expressão dos genes de virulência BRC1 e SAP2, e in vivo no efeito protetor desses medicamentos na infecção experimental por C. albicans em modelo de Galleria mellonella. Os dados foram analisados por teste t, ANOVA, Kruskal-Wallis, Dunn e Kaplan-Meier (p<0,05). A Concentração Inibitória Mínima (CIM) para ambos os IPs-HIV testados foi 512 µg/mL. Nos biofilmes, a redução na contagem de UFC/mL de C. albicans nos grupos tratados com IPs-HIV foi de até 6,81 Log. A biomassa dos biofilmes tratados também sofreu reduções significantes para ATV (82%), DRV (81%) comparada ao grupo controle.DRV e ATV promoveram redução estatisticamente significante de expressão gênica de SAP2 e BRC1, respectivamente, quando comparados ao controle (p<0,05). Em relação à morfogênese de C. albicans, ATV e DRV inibiram significativamente a formação de hifas (p=0,0183). No estudo in vivo, o uso profilático de ATV e DRV em G. mellonella infectadas com C. albicans prolongou em até 40% a sobrevivência das larvas (p=0,0004). Conclui-se que ATV e DRV inibiram a filamentação e apresentaram atividade antifúngica, antibiofilme e na expressão de genes de fatores de virulência de C. albicans e preveniram candidose em G. mellonella(AU)

ABSTRACT

Candida albicans is a fungus that usually colonizes mucous surfaces of humans and can assume pathogenic character depending on host factors. Patients with Human Immunodeficiency Syndrome, caused by the Human Immunodeficiency Virus (HIV), are favorable to present mucous candidosis due to the cellular immunodeficiency they present. The introduction of Antiretroviral Therapy (ART), especially the emergence of HIV Protease Inhibitors (HIV-PI), has drastically reduced the incidence and prevalence of these mycosis over the years. Clinical and epidemiological studies with firstgeneration HIV-PIs have shown that this reduction is not exclusively due to the immunological improvement promoted by ART, and in vitro research has already demonstrated antifungal and antibiofilm properties of firsts-generations HIV-PIs on C. albicans. Thus, the aim of this study was to evaluate the effects of Atazanavir (ATV) and Darunavir (DRV), two HIV-PIs of second and third generation respectively currently in clinical use in Brazil, on virulence factors of C. albicans. For this purpose, studies were carried out with two clinical strains of C. albicans isolated from lesions of oropharyngeal candidosis of HIV positive patients to evaluate in vitro action of the drugs on morphogenesis, biofilm formation (number of viable cell and biomass determination) and virulence factor genes BRC1 and SAP2 expression and in vivo on the protective effect of these drugs on experimental infection by C. albicans in Galleria mellonella model. Data were analyzed by t Student, ANOVA, Kruskal-Wallis and Dunn and Kaplan-Meier (p<0.05) tests. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) for both tested HIV-PIs was 512 µg/mL. In biofilms, a reduction in the CFU/mL count of C. albicans in the groups treated with HIV-PIs was up to 6.81 log. The biomass of biofilms also suffered significant reductions for ATV (82%) and DRV (81%) compared to the control group. DRV and ATV statistically significantly downregulated the expression of SAP2 and BRC1 genes respectively (p<0,05). Regarding the morphogenesis of C. albicans, ATV and DRV inhibited the formation of hyphae (p = 0.0183). In the in vivo study, the prophylactic use of ATV and DRV in G. mellonella infected with C. albicans prolonged larval survival by up to 40% (p = 0.0004). We can conclude that ATV and DRV inhibited filamentation and showed antifungal activity, being able to inhibit growth, formation and virulence factors gene expression of C. albicans biofilm and prevented candidosis in G. mellonel(AU)